2022-111
原代心肌細胞間作為主要研究模型廣泛應用于心血管研究，經過長期的嘗試，我們實驗室找到了一些行之有效的方法，積累了一些經驗。總結如下：1、細胞分散和接種均勻度分離出來的心肌細胞在溶液中Ca2+的作用下容易結塊，因此，在差動貼壁前后，應將心肌細胞輕輕吹吹多次，形成單一分散狀態。接種后，心肌細胞應均勻分布在培養板上避免細胞聚集到培養孔中心另外，將培養板放入培養箱后，用滴管輕輕吹每個孔中心部分2~3次，但要特別注意避免污染。2、成纖維細胞的抑制和血清類型的選擇成纖維細胞比原代心肌細胞間...
查看更多2021-1213
細胞培養基是人工模擬動物體內細胞生長環境，維持細胞體外存活和增殖的營養基礎。它的主要功能是為細胞提供合適的pH值和滲透壓，以及細胞自身不能合成的各種營養物質。細胞培養基系列產品包括旨在支持和維持細胞系生長的產品，適用于多種哺乳動物細胞和細胞系，經過長時間的測試和驗證。我們開發的即用型培養基產品包括粉末和濃縮物，可以滿足您的實驗設施和預算的雙重需求。培養基中特別添加了能有效改善細胞生長狀態的營養成分和針對不同物種特選的優質培養基，適用于各種干細胞的體外培養。1、預先加入穩定形態...
查看更多2021-1124
雙熒光素酶報告基因檢測熒光素（Luciferase）是自然界中能夠產生生物發光的酶的統稱，其中螢火蟲熒光素F-Luciferase和海腎熒光素R-Luciferase具有代表性。研究者利用熒光素酶開發出一套極其靈敏且使用方便的基因報告系統。目前，雙熒光素酶通常是指螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素。這兩種酶的主要區別：1.物種來源不同；2.它們的底物和輔因子不同；3.發光的顏色不同。螢火蟲螢光素酶是一種胞內蛋白，從甲蟲（Photinuspyralis）中分離得到，大小為61KDa。在...
查看更多2021-118
作為主要的研究模型，原代心肌細胞被廣泛應用于心血管研究。那么我們在研究過程中都要注意些什么呢？1、新生鼠年齡的選擇新生鼠心肌細胞在出生后3天內具有部分增殖能力，而成年鼠心肌細胞為終末分化細胞，不再具有分裂增殖能力。因此，大鼠出生時間越短，離體心肌細胞存活率越高，越容易貼壁。大量觀察表明，選擇1～3日齡大鼠分離心肌細胞進行原代培養是理想的，尤其是半日齡大鼠。2、消化酶的選擇和使用新生大鼠原代心肌細胞間可采用組織塊法和消化法分離。前者較少使用，因為難以獲得密度均勻的細胞和控制成纖...
查看更多2021-1021
一文帶你全面了解細胞因子一、細胞因子的概念細胞因子（cytokine，CK），是由免疫細胞（如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等）和某些非免疫細胞（內皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等）經刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學活性的小分子蛋白質（多肽或糖蛋白）。細胞因子的發現歷史1957年，發現干擾素（interferon，IFN）1969年，提出淋巴因子（lymphokine）的概念1974年，定名細胞因子（cytokine，CK）1975年，命名了腫瘤壞死因子（Tumo...
查看更多2021-923
RNApulldown實驗技術1.實驗原理RNApulldown是體外研究RNA與蛋白互作的重要技術。該技術是用生物素標記體外轉錄的靶RNA分子，再用鏈霉親和素純化出與靶RNA結合的蛋白復合體，洗脫得到RNA結合蛋白質。再通過westernblot實驗檢測特定的RNA結合蛋白是否與靶RNA結合；或通過質譜儀檢測可以篩選出與靶RNA結合的蛋白。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用；其中活化生物素可以在蛋白質交聯劑的介導下，與已知的幾乎所有生物大分子偶聯。因此...
查看更多2021-923
DNApulldown實驗技術1.實驗原理DNApulldown是體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術將生物素標記的DNA片段結合在鏈霉親和素磁珠上，再與細胞核蛋白孵育，純化出與DNA片段互作的蛋白，洗滌洗脫得到的蛋白產物，做Westernblot檢測特定蛋白是否與靶DNA片段結合；做質譜鑒定即可篩選出與DNA片段可能互作的蛋白信息(如：轉錄因子、組蛋白等)。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用；其中活化生物素可以在蛋白質交聯劑的介導下，與已知的幾乎...
查看更多2021-923
GSTPulldown實驗技術1.實驗原理Pulldown技術是將"誘餌"蛋白與一種易于純化的配體標簽（如：GST標簽、His標簽）進行融合表達，而帶標簽的誘餌蛋白能被特異結合該標簽的固相親和配基捕獲，形成"次級親和支持物"，用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產物洗脫后，經Westernblot驗證或LC-MS/MS，即鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-轉移酶（GST）融合標簽從細菌中一步純化出GST融合蛋白。從此，GST融合蛋白在蛋白...
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